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如何使用離心過濾器
當(dāng)開始大量濃縮時，讓它先旋轉(zhuǎn)5分鐘，以確定溶液流過過濾器的速度，然后用它來決定旋轉(zhuǎn)所需的時間。zui好先旋轉(zhuǎn)不超過15分鐘，然后用移液管輕輕混合樣品2-3次，以避免堵塞膜，從而避免在此階段損失您的辛勤工作和金錢。當(dāng)混合時，你會看到靠近膜的粘性更大的蛋白質(zhì)溶液漩渦上升并擴(kuò)散到濃度較低的溶液中。移液時，特別注意不要用移液器尖端接觸和破壞膜，并且只能從過濾器邊緣移液。

離心過濾器故障排除
蛋白質(zhì)沉淀
人們在使用離心過濾器時面臨的一個常見問題是蛋白質(zhì)沉淀的問題。這主要是因?yàn)闈饪s時蛋白質(zhì)梯度的形成和膜附近的局部高濃度。如上所述，可以通過定期混合溶液來避免這種情況。

另外，確保緩沖液的酸堿度不要太接近你感興趣的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。

最后，確保緩沖液中的DTT是新制成的。DTT在pH 8.0時不穩(wěn)定，隨著時間的推移可能失活。因此，二硫鍵的形成可能以隨機(jī)和非自然的方式開始，并因此形成不同的蛋白質(zhì)二硫化物低聚物，其可能是不溶的。

蛋白質(zhì)與離心過濾膜的結(jié)合
這一特性很大程度上取決于過濾器膜的組成，無論是聚砜、聚酯砜還是再生纖維素。就我個人而言，避免再生纖維素，因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)與膜的結(jié)合是這些過濾器更大的問題。許多人添加0.1%(體積比)吐溫20或Triton X-100來緩解這個問題。為了提高樣品的濃縮速度，同時使用幾個離心過濾器是很有誘惑力的，但這不是一個好主意，因?yàn)檫@可能會由于蛋白質(zhì)與膜結(jié)合的潛在問題而增加損失。

zui后，濃縮蛋白質(zhì)后，檢查濃度通過獲取280納米處的吸光度或使用布拉德福測定法，以方便和可用的為準(zhǔn)。

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